Антиген dvi rh1 положительный что это

Антиген dvi rh1 положительный что это

Исследование включает в себя определение наличия на исследуемых эритроцитах наиболее клинически значимых антигенов системы Rh (C, E, c, e) и Kell (K).

Анализ крови на фенотип, риск гемотрансфузионных осложнений, анализ крови на эритроцитарные антигены.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Общая информация об исследовании

На поверхности красных кровяных телец-эритроцитов находится более 250 антигенов, которые разделяются на 29 генетических систем. Каждая система кодируется собственным геном (или группой генов). Значение этих антигенов состоит в том, что они способны образовывать комплексы с антителами, с исходом в образование реакции агглютинации эритроцитов. Такие комплексы могут возникнуть при иммунном ответе во время переливании крови у реципиента с отсутствием какого-либо антигена, если у донора данный антиген присутствует. Наибольшее клиническое значение групп крови, основанных на наличии различных антигенов, находится в области трансфузиологии и акушерстве (так как могут возникать реакции антиген-антитело при разном антигенном статусе крови матери и плода).

Е и е антигены кодируются аллелями гена RHCE и являются кодоминантными. Во всех популяциях е встречается чаще, чем Е (примерно 30% белого населения имеют Е и 98% имеют е-антигены). Е имеет более сильные иммуногенные свойства, чем е. В редких случаях может быть наследование инактивированных или частично неактивных генов RHCE, которые не кодируют Е- и е-антигены и/или не кодируют С- и с-антигены.

Система Kell также является одной из наиболее важных групп крови в транфузиологии и в акушерской практике. Антитела Kell считаются значительно иммуногенными. Система группы крови Kell содержит 35 антигенов, из которых K/k (KEL1/KEL2), Kp a /Kp b (KEL3/KEL4), Js a /Js b (KEL5/KEL6) являются наиболее важными.

Исследование системы Rh (С, Е, с, е) и Kell успешно проводится методами реакции с моноклональными антителами и гель-фильтрацией. В первом методе используются специальные моноклональные смеси, предназначенные только для прямого тестирования и не используются в антиглобулиновом тесте. Rh-типирование также выполняется с использованием гель-фильтрации. Антисыворотка распределяется равномерно по всем частицам гелем. Антиген-положительные эритроциты реагируют с антисывороткой, при этом агглютинины связываются и не могут высвободиться из геля при центрифугировании.

Когда назначается исследование?

Что означают результаты?

Референсные значения: «отрицательно» для всех компонентов исследования.

Система Rh имеет пять разновидностей антигенов: C, D, E, c, e. Наиболее иммуногенным является антиген D. Иммуногенность других антигенов системы «резус» существенно ниже и убывает в следующем ряду: с > Е > С > е. Фактор Kell (K) стоит на втором месте после фактора D в шкале трансфузионно опасных антигенов эритроцитов.

Наличие или отсутствие определенных белков на мембране эритроцитов (фенотип антигенов) преимущественно определяется наследованием от родителей и не меняется в течение жизни. Люди, у которых отсутствует какой-либо конкретный антиген, могут развивать иммунный ответ с образованием антител при попадании в организм эритроцитов, несущих этот антиген. Такая ситуация возможна при переливаниях донорской крови или при прохождении эритроцитов плода в кровь матери во время беременности. Клиническими следствиями появления таких «аллоантител» являются гемолитические реакции при переливании крови, которая содержит эритроциты, несущие соответствующий антиген, и гемолитическая болезнь новорождённых вследствие прохождения через плаценту материнских IgG-антител, направленных против эритроцитарных антигенов плода. В результате воздействия аллоантител, направленных против эритроцитарных антигенов, эритроциты разрушаются (происходит гемолиз эритроцитов). Риск появления аллоиммунных антител повышен при сенсибилизации предыдущими переливаниями крови, выкидышами с трансплацентарным кровотечением, предыдущими беременностями с иммунологическим конфликтом при отсутствии соответствующей терапии.

Кто назначает исследование?

Трансфузиолог, акушер-гинеколог, хирург, онколог, уролог.

40 Группа крови и резус-фактор

13 Аллоиммунные антиэритроцитарные антитела (в том числе антирезусные), титр

Источник

Приём и исследование биоматериала

Подробное описание исследования

Мембрана каждого эритроцита крови содержит 400 видов различных антигенов (углеводы или белки, встроенные в мембрану клетки). Они выполняют различные функции: структурную, транспортную, ферментативную, адгезивную (присоединение различных молекул к эритроциту). В нормальных условиях эти антигены не вызывают реакцию иммунной системы человека, так как являются «своими». Однако, когда пациенты получают переливание крови, их иммунная система атакует любые донорские эритроциты, содержащие антигены, отличные от их собственных антигенов. Подобная ситуация может возникнуть во время беременности, когда антигены эритроцитов плода отличаются от материнских. Так возникает резус-конфликт у беременных. Поэтому важно знать набор антигенов эритроцитов в этих двух ситуациях. При переливании крови необходимо обеспечить, чтобы антигены переливаемых эритроцитов соответствовали антигенам эритроцитов пациента.

Антигены эритроцитов представляют собой сахара или белки, они присоединены к различным компонентам мембраны красных кровяных телец. Например, антигенами определяющие группу крови (A, B, O), являются сахара. Важными также являются антигены резус-фактора Rh, они являются белками. Присутствие или отсутствие антигена D резус-фактора на мембране эритроцитов определяет положительный или отрицательный резус-фактор.

К системе резус-фактора Rh относятся также антигены (белки) С, с, Е, е, CW. С и Е антигены встречаются у людей в разных комбинациях: СЕ, сЕ, Се и се. CW является вариантом антигена С, встречается редко, но при несовместимости с организмом-хозяином вызывает сильную реакцию. Кроме системы резус-фактора, существует также система Kell, которая содержит множество антигенов. Основные антигены системы Kell – К, k, могут присутствовать у людей в комбинациях КК, Кk, kk. Эти антигены играют важную роль при трансплантологии, в акушерстве и при выявлении и лечении редких заболеваний крови. Антигены системы Kell появляются у плода на ранних сроках беременности и при несовместимости с материнскими могут вызывать гемолитическую болезнь новорожденных – заболевание, при котором антитела матери уничтожают эритроциты плода, и плод (или новорождённый) погибает.

Присутствие определенного набора антигенов на мембране эритроцитов передается по наследству от родителей и не изменяется в течение жизни. Одни антигены (например, антиген D) имеют большую иммуногенность, то есть вызывают более сильный иммунный ответ, что вызывает серьезные последствия при переливании крови и беременности с другим набором антигенов. Другие антигены менее иммуногенны (например С, Е), то есть гораздо реже вызывают нежелательные реакции. Однако в случае нескольких переливаний крови, например, людям, страдающим от таких заболеваний как серповидно-клеточная анемия, количество вырабатываемых антител возрастает от раза к разу, что приводит к отторжению красных кровяных телец донора. Поэтому крайне важным является выявление антигенов эритроцитов у таких больных, а также у доноров, для правильного подбора донорской крови.

В акушерстве фенотипирование (определение фенотипа, то есть набора антигенов) эритроцитов помогает вовремя назначить специальную терапию при конфликте резус- или Kell-систем матери и ребенка и спасти таким образом плод.

Источник

Определение группы крови

В 1901 году выдающийся ученый Карл Ландштейнер открыл группы крови и заложил основы современной трансфузиологии. Исследователь выявил три группы на основании различных вариантов реакции агглютинации эритроцитов и сывороток крови. Материал для исследования был взят у сотрудников собственной лаборатории. Ученики Ландштейнера Декастелло и Стюрли несколькими годами позже открыли четвертую группу, но посчитали ее сомнительной и исключили из результатов исследований. В 1906 году психиатр из Праги Ян Янский подтвердил существование группы AB (IV). Публикация исследования в местном издании оказалась практически незамеченной. В 1910 году после повторного обнаружения четвертой группы Моссом Ян Янский был вынужден доказывать первенство открытия. Чешский ученый предложил цифровое обозначение групп крови: I, II, III, IV.

В трансфузиологии группами крови называют различные сочетания антигенов эритроцитов. Антигены являются генетическими признаками: наследуются от родителей и остаются неизменными на протяжении жизни. В 1980 году Международное сообщество переливания крови разработало числовую терминологию для антигенов эритроцитов. Выделены 23 системы группы крови, включающие 194 антигена. Нумерация в большинстве случаев соответствует порядку обнаружения. Входящие в каждую из 23 систем антигены кодируются шестизначным номером: первые три цифры являются номером системы, оставшиеся три – указывают на специфичность антигена внутри системы.

Система группы крови AB0

Групповая принадлежность по системе AB0

По мере движения с запада на восток Евразии частота обнаружения антигена A падает, а антигена B возрастает. Антиген 0 редко встречается в Азии, но имеет широкое распространение у коренных народов Южной Америки, Полинезии и Австралии. Причина – эпидемии инфекционных заболеваний.

Результат типирования крови записывают в историю болезни или в карту донора. Врач-трансфузиолог указывает дату и ставит подпись.

В отдельных случаях во время типирования наблюдается слабовыраженная агглютинация эритроцитов. Недостаточно выраженная реакция объясняется наличием слабых вариантов антигенов A и B. Наибольшее клиническое значение представляют подгруппы A₁ и A₂. Впервые слабые варианты были обнаружены в 1911 году учеными Dungern и Hirszeld. Позднее в 1930 году Landsteiner и Levine предложили названия подгруппы – A₁ и A_2. A₂ встречается до 20 % в группе A и до 35 % в группе AB. Сыворотка лиц из образцов крови A₂ может содержать анти-A₁-антитела: в 2 % случаев в группе A₂ и в 30 % в A₂B. Антитела анти-A₁ представляют опасность ввиду агглютинации эритроцитов группы A.

Методика определения групп крови A₂ и A₂B

Частота выявления эритроцитов A₂ существенно варьируется в зависимости от применяемых реагентов. Приводим сравнение результатов исследования при использовании различных методик типирования групп крови A₂ и A₂B.

Примечание: * — агглютинация выражена слабо, присутствуют мелкие агглютинаты на розовом фоне.

Наибольшую точность исследования обеспечивает Анти-A₁ (лектин, фитогемагглютинин). Тест рекомендован для выявления подгрупп антигена A у детей младше двух лет. Причина – физиологическая незрелость эритроцитов новорожденных, влекущая ошибочные результаты исследования со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками.

В 1930 году Landsteiner и Levine обнаружили подтип Aint: промежуточный вариант между A₁ и A₂. Данный антиген характерен для негроидов и достигает 8,5 % у лиц с группой крови A. У европеоидов Aint наблюдался лишь у 1 % людей со второй группой крови. В крайне редких случаях у человека отсутствуют все антигены системы AB0. Фенотип «Бомбей» обусловлен генотипом hh. При отсутствии антигена H у лиц данной категории обнаруживаются анти-A и анти-B антитела.

Методика определения групп крови

Алгоритм выявления группы крови гемагглютинирующими сыворотоками

Для определения группы крови AB0 прямым методом используют две серии стандартных изогемагглютинирующих сывороток. Подготовьте две серии сывороток трех групп с титром 1:32 или выше. Для забора каждой сыворотки используйте отдельную маркированную пипетку. Подготовьте сыворотку AB(IV) для контроля.

В последнем случае следует удостовериться в отсутствии неспецифической реакции: нанесите на планшет 2 – 3 капли соответствующей группе AB(IV) сыворотки и добавьте одну каплю анализируемых эритроцитов. Перемешайте жидкости и оцените результат спустя пять минут. Отсутствие агглютинации свидетельствует о принадлежности к группе AB(IV), наличие – признак неспецифической реакции. В этом случае, а также при слабовыраженной агглютинации повторите исследование с другими сериями сывороток.

Техника определения группы крови цоликлонами

Моноклональные антитела к антигенам эритроцитов пришли на смену изогемагглютинирующих сывороток. Для каждого типирования достаточно одной серии реагентов анти-A, анти-B, анти-AB. Внедрение моноклональных реагентов позволило значительно упростить и стандартизировать методику типирования по системе AB0. Приводим краткое пошаговое руководство проведения исследования на планшете.

Обычно реакция обнаруживается уже в первые секунды после смешивания. При этом слабые варианты антигенов A и B могут давать более позднюю агглютинацию.

Непрямой метод типирования: алгоритм действий

Методика определения основана на взаимодействии эритроцитов от предварительно типированных лиц групп 0, A, B или смеси эритроцитов от нескольких одногруппных доноров с изогемагглютининами α и β в исследуемой сыворотке.

При работе с каждым типирующим реагентом используйте сухие чистые пипетки. Промывание палочек для перемешивания и пипеток осуществляйте в 0,9 % растворе NaCl.

Заключение о групповой принадлежности

Система Резус

Levine и Stetson обнаружили антигены системы Резус в 1939 году. Ученые изучали причины развития гемолитических реакций у рожениц при трансфузиях женщинам идентичных по системам AB0, MN и P. эритроцитов мужей. Годом позже Landsteiner и Wiener продуцировали выработку антител посредством иммунизации кроликов эритроцитами обезьян макака-резус. Антитела получили название анти-RH антитела. Полученные агглютинины вступали в реакцию агглютинации с эритроцитами макак-резус и с эритроцитами 85 % граждан Нью-Йорка белой расы. Вызвавший образование антител антиген получил название RH-фактор (D-фактор).

В редких случаях эритроциты людей не содержат ни одного антигена резус. Фенотип обозначают Rh_null. Ген Xr_o в этом случае представлен в гомозиготной форме и подавляет продуцирование всех антигенов. Обладатели фенотипа Rh_null не проявляют агглютиногеной активности, но имеют возможность передавать антигены по наследству.

Среди европейцев частота резус-положительных по антигену D лиц составляет 85 %. На мембране красных кровяных телец обычно расположено около 10 000 – 30 000 молекул D. При этом существуют два особых типа D-положительных лиц: D u (слабый) и D partial (частичный). Иммунная система D u и D partial способна вырабатывать анти-D-антитела.

Слабый антиген встречается у 1,5 % резус-положительных лиц и характеризуется низким числом (100 – 500) молекул D на мембране. Является иммуногенным для резус-отрицательных лиц. При этом переливание D-положительных эритроцитов больным со слабым D может вызвать сенсибилизацию кровяных телец донора. Эритроциты с D u слабо агглютинируются или совсем не вступают в прямую реакцию агглютинации с полными анти-резус антителами. Определение резус-принадлежности производят в непрямом антиглобулиновом тесте. Носителей D u считают резус-положительными донорами и резус-отрицательными реципиентами.

Антитела против антигенов резус являются иммунными. Возникают вследствие изосенсибилизации. Специфичность определяется спровоцировавшими образование антител антигенами. Выделяют полные и неполные антитела.

Полные являются IgM антителами. Отличаются большим молекулярным весом, обнаруживаются реже по сравнению с неполными антителами. Способны агглютинировать резус-положительные эритроциты. Имеют меньшее значение при трансфузиях.

Неполные преимущественно относятся к классу IgG. Закрепляются на поверхности резус-положительных эритроцитов без образования агглютинатов. Склеивание кровяных телец осуществляется при наличии коллоидных растворов и протеолитических ферментов или после обработки антиглобулиновой сывороткой. Обладают меньшим в сравнении с полными антителами молекулярным весом. Способны проходить через плаценту. Во время сенсибилизации сперва продуцируются полные антитела, далее в большей мере вырабатываются неполные (иммуноглобулины IgG) антитела.

Техника выявления резус-фактора с использованием цоликлона Анти-D-Супер

В случае наступления реакции кровь оценивается как резус-положительная (Rh+), при отсутствии реакции – как резус-отрицательная (Rh-). При отрицательной либо слабо выраженной агглютинации необходимо повторно провести исследование с неполными анти-D IgG антителами с целью выявления слабого или частичного антигена D.

Методика определения резус-фактора D u в пробирочном тесте

Параллельно с анализом выполняют постановку трех контрольных проб: реагента цоликлон Анти-D (анти-D IgG) со стандартными резус-положительными и резус-отрицательными эритроцитами, анализируемых эритроцитов с раствором желатина без диагностикума анти-D IgG.

Отсутствие результатов реакции с анти-D IgM и выраженная агглютинация с анти-D IgG свидетельствуют об обнаружении слабых форм антигена D. При слабо выраженной агглютинации следует повторить исследование в непрямой пробе Кумбса.

Определение резус-принадлежности стандартным универсальным реагентом

Стандартный реагент антирезус Rh₀D содержит поликлональные неполные анти-D-антитела. Параллельно с анализом образца осуществляется контрольное исследование реагента Rh₀D со стандартными резус-положительными (одногруппными или группы 0) и резус-отрицательными (одногруппными) эритроцитами.

Результат считается достоверным только после проверки контрольных образцов: наступлении реакции со стандартными резус-положительными и отсутствии реакции – с резус-отрицательными эритроцитами.

Информацию о пошаговой постановке непрямого теста Кумбса с использованием неполных анти-D-антител читайте в разделе сайта «Реакция Кумбса».

Источник

Антиген dvi rh1 положительный что это

ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, Москва, Россия

ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, Москва, Россия

ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, Москва, Россия

ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, Москва, Россия

ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, Москва, Россия

ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, Москва, Россия

ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, Москва, Россия

ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, Москва, Россия

ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, Москва, Россия

ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, Москва, Россия

ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, Москва, Россия

Молекулярно-серологические характеристики типов слабого антигена D системы резус

Журнал: Терапевтический архив. 2016;88(7): 78-83

Головкина Л. Л., Стремоухова А. Г., Пушкина Т. Д., Каландаров Р. С., Атрощенко Г. В., Васильева М. Н., Сурин В. Л., Саломашкина В. В., Пшеничникова О. С., Митерев Г. Ю., Паровичникова Е. Н., Савченко В. Г. Молекулярно-серологические характеристики типов слабого антигена D системы резус. Терапевтический архив. 2016;88(7):78-83.
Golovkina L L, Stremoukhova A G, Pushkina T D, Kalandarov R S, Atroshchenko G V, Vasilyeva M N, Surin V L, Salomashkina V V, Pshenichnikova O S, Miterev G Yu, Parovichnikova E N, Savchenko V G. Molecular serological characteristics of weak D antigen types of the Rhesus system. Terapevticheskii Arkhiv. 2016;88(7):78-83.
https://doi.org/10.17116/terarkh201688778-83

ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, Москва, Россия

Резюме Цель исследования. Оценка распространенности типов слабого антигена D (weak D) системы резус у россиян и возможности выявления этих типов серологическими методами. Материалы и методы. Исследовали эритроциты и ДНК людей с ослабленной экспрессией антигена D с помощью реакции агглютинации эритроцитов в солевой среде (2 метода); реакции агглютинации в гелевых колонках с IgM+IgG анти-D-антителами, непрямого антиглобулинового теста с IgG анти-D-антителами (2 метода); полимеразной цепной реакции для установления типа weak D. Результаты. В 2014—2015 гг. резус-фенотип определен у 5100 человек. Ослабление агглютинабельных свойств эритроцитов выявлено у 102 (2%) обследованных. Генотипирование для идентификации вариантов антигена weak D проведено у 63 обследованных, выявлено 6 типов weak D. Наиболее частыми оказались типы weak D type 3 (n=31; или 49,2%) и weak D type 1 (n=18; или 28,6%), в том числе в одном случае weak D type 1.1 (1,6%). Остальные 4 типа антигена weak D имели следующие частоты: weak D type 2 — 14,3% (n=9), weak D type 15 — 4,8% (n=3), weak D type 4.2 (DAR) (n=1) и weak D type 6 (n=1) — по 1,6% каждый. Наиболее чувствительным серологическим методом идентификации антигена weak D был антиглобулиновый тест в гелевых колонках, содержащих антиглобулиновую сыворотку. В 2 образцах эритроцитов с фенотипами Ccdee и ccdEe наличие weak D type 15 установлено только молекулярным методом. Заключение. Серологическими методами слабый антиген D выявлен в 96,8% случаев. Особое внимание при проверке на наличие weak D следует уделять людям с D-отрицательным фенотипом, имеющим антигены С или Е. Наши исследования, проведенные впервые в России, позволят улучшить иммунологическое обеспечение безопасности трансфузий пациентам сред, содержащих эритроциты.

ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, Москва, Россия

ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, Москва, Россия

ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, Москва, Россия

ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, Москва, Россия

ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, Москва, Россия

ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, Москва, Россия

ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, Москва, Россия

ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, Москва, Россия

ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, Москва, Россия

ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, Москва, Россия

ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, Москва, Россия

ПЦР — полимеразная цепная реакция

ССЭ — среды, содержащие эритроциты

OD — оптическая единица

Среди выявленных в настоящее время 35 антигенных систем эритроцитов самой полиморфной является система резус. Она включает 59 антигенов. Биосинтез антигенов системы резус кодируется двумя генами — RHD и RHCE, расположенными на коротком плече 1-й хромосомы (1p36.11) [1]. Эти два гена имеют высокую степень гомологии — 93,8%, касающуюся всех интронов и кодирующих экзонов [2]. Гены расположены близко друг к другу, но в обратной ориентации: <RHCE(5′->3′)-(3′ Таблица 1. Распространенность типов антигена weak D и фенотипов антигенов системы резус у weak D-положительных лиц Всего, % 100 74,5 4,8 3,2 14,3 1,6 1,6

Сведения о силе и времени появления агглютинации с эритроцитами разных типов weak D суммированы в табл. 2, чувствительность серологических методов при определении типов weak D — в табл. 3.

Таблица 2. Серологическая характеристика эритроцитов с разными типами weak D Примечание. отр — реакция отрицательная, агглютинация отсутствовала.

Таблица 3. Чувствительность серологических методов выявления разных типов weak D

Агглютинация эритроцитов weak D type 1 с цоликлоном анти-D-супер класса IgM на плоскости (метод № 1) идентифицирована в 55,6% случаев (см. табл. 2, 3), формировалась, как правило, к 3-й минуте и была мелкой. В реакции солевой агглютинации (метод № 2) положительный результат получен уже в 83,3% случаев, разведение анти-D IgM антител колебалось от 1:2 до 1:32. Таким образом, дополнительная инкубация тестируемых эритроцитов с полными анти-D-антителами в течение 1 ч способствовала лучшему склеиванию эритроцитов. В методе № 3 положительный результат на 1+ и 3+ получен в 66,7% случаев. Применение непрямого антиглобулинового метода в классической постановке (метод № 4) повышало выявляемость weak D type 1 до 94,1%, а в гелевых картах (метод № 5) — до 100%.

Мелкая агглютинация эритроцитов weak D type 2 с анти-D Цоликлоном класса IgM (метод № 1) формировалась к 5-й минуте наблюдения только у 1 из 9 обследованных лиц, частота выявления составила 11,1% (см. табл. 2, 3). В реакции солевой агглютинации (метод № 2) положительный результат получен в 77,8% случаев, разведение анти-D IgM антител колебалось от 1:8 до 1:32. В гелевых картах (метод № 3) реакцию на 1+ —2+ наблюдали у 4 (44,4%) из 9 человек. Методы, основанные на непрямом антиглобулиновом тесте, были более чувствительными. Непрямая проба Кумбса в классической постановке (метод № 4) позволяла идентифицировать антиген weak D type 2 в 88,9% случаев, а в гелевых картах LISS/COOMBS (метод № 5) — в 100% случаев.

Генотипирование позволило выявить weak D type 3 у 31 человека, из которых у 30 (96,8%) наблюдали формирование на плоскости мелкой агглютинации в основном ко 2—3-й минуте (метод № 1). В реакции солевой агглютинации разведение анти-D моноклонального реагента колебалось от 1:16 до 1:1024, в гелевых картах сила реакции составляла от 3+ до 4+. Отдельно дадим характеристику одного образца эритроцитов: моноклональные анти-D-антитела IgM класса не агглютинировали эритроциты на плоскости, разведение антител в методе 2 составило 1:2, в гелевых картах сила реакции была на 1+. Методы с применением неполных анти-D-антител (методы № 4 и № 5) позволяли выявить антиген weak D в 100% случаев, сила реакции в геле составляла от 3+ до 4+ (см. табл. 2, 3).

Серологические методы успешно выявляли экспрессию weak D type 4.2 (DAR) и weak D type 6 (см. табл. 2). Экспрессию weak D type 15 удалось выявить на эритроцитах только одного образца и только с помощью непрямого антиглобулинового теста в классическом исполнении (метод № 4) и гелевых колонках (метод № 5) (см. табл. 2), а с эритроцитами еще двух образцов все серологические методы показали отрицательный результат. Поскольку фенотип эритроцитов у этих людей определен как Ccdee и ccdEe, решено выполнить генетическое исследование, при котором и установлено наличие weak D type 15.

Таким образом, самыми эффективными серологическими методами выявления антигенов weak D являются те, что основаны на непрямом антиглобулиновом тесте, выполняемом в гелевых колонках. Однако и эти методики не позволяют идентифицировать некоторые типы слабого D, например некоторые варианты weak D type 15. Мы описали новый методический подход к выявлению таких типов weak D, основанный на применении отдельных неполных моноклональных антител, а не их смеси [22].

Обсуждение

Современные молекулярные методы исследования позволяют идентифицировать редкие аллели генов RHD, продукты которых выявляются серологическими методами как слабый антиген D — weak D. При очень слабой выраженности антигена weak D вследствие крайне малого количества антигенных детерминант на эритроците серологические методы для его выявления неэффективны. В проведенных нами исследованиях в большинстве случаев weak D выявляли всеми 5 серологическими методами. При этом во всех случаях отмечали появление более мелкой агглютинации и увеличение времени реакции (до 1—3 мин вместо 0—5 с) по сравнению с контролем, а в реакции агглютинации в солевой среде — снижение титра реакции на 4—10 ступеней по сравнению с положительным контролем. В целом наиболее эффективным методом выявления weak D остается непрямая проба Кумбса, особенно при использовании гелевых колонок с антиглобулиновой сывороткой. Так, только в этом тесте выявлены weak D type 15 (1 случай), weak D type 1 (1 случай), weak D type 2 (1 случай). В проведенных исследованиях скорость реакции в непрямой пробе Кумбса с эритроцитами weak D type 3 (в большинстве случаев 1 мин) оказалась выше, чем с эритроцитами weak D type 1 и weak D type 2 (чаще всего 2 мин), что можно объяснить разным количеством антигенных детерминант на эритроцитах. В 2 случаях антиген weak D type 15 серологически не выявлялся ни одним методом, и этот тип антигена D идентифицирован только молекулярным методом. Таким образом, в настоящее время в иммуногематологической практике нет серологического метода и реактивов, которые обеспечивали бы определение всех без исключения типов weak D. Только молекулярно-генетическое исследование гарантирует выявление всех этих вариантов. Наша работа является продолжением исследований, начатых еще в прошлом столетии Т.М. Пискуновой. Именно она в 70-х годах XX века первой провела работу по изучению серологических свойств эритроцитов с weak D [23, 24] и отметила их разную агглютинабельность.

Трансфузиологическая стратегия. Определение типов антигена weak D зависит от чувствительности типирующих реактивов и применяемых методик. В большинстве стран реципиентов относят к D+ и переливают D±эритроциты, если эритроциты потенциальных реципиентов агглютинируются двумя сериями анти-D-реактивов класса IgM. Но такие реактивы не агглютинируют эритроциты с парциальным антигеном DVI. Больным с антигеном DVI переливают эритроциты от D-отрицательных доноров для устранения риска анти-D-аллоиммунизации.

F. Wagner и соавт. [16] предложили свой алгоритм выявления типов антигена weak D и соответствующую трансфузионную тактику для реципиентов. По их мнению, следует принимать во внимание распространенность типов weak D в популяции и качественные изменения их антигенных структур, т. е. оценивать риск анти-D-аллоиммунизации. D±эритроциты следует переливать больным со слабым D, имеющим на своих эритроцитах схожую или более высокую плотность антигенов, чем у людей с weak D type 2. Таким образом, пороговое значение плотности антигенных детерминант D составит около 400 на 1 эритроцит. Этот показатель является и пороговым значением чувствительности для анти-D-антител класса IgM, применяемых в реакции солевой агглютинации в пробирках или в гелевых картах. Авторы предлагают использовать эритроциты с weak D type 2 для контроля качества реактивов анти-D, применяемых для фенотипирования, что реализовано на практике специалистами из США. У представителей европеоидной расы чаще выявляют слабый антиген D тип 1, тип 2 и тип 3 — в 97% случаев [12]. Плотность антигена D при этих вариантах превышает пороговое значение 400 антигенов на один эритроцит. Поэтому таким реципиентам в 97% случаев для переливания будут ССЭ от резус-положительных доноров [20]. Если для идентификации антигена D необходима постановка непрямого антиглобулинового теста, значит его плотность на клетке ниже пороговой, и таким пациентам следует переливать эритроциты от D-отрицательных доноров. Число таких больных составит около 3%.

Стратегия по отношению к донорам компонентов крови иная: все потенциально иммуногенные D+ образцы эритроцитов следует относить к резус-положительным. Для выявления слабых вариантов антигена D у доноров следует применять высокочувствительные методики, основанные на непрямом антиглобулиновом тесте, и реактивы на основе IgG-антител [25].

Суммируя перечисленное, трансфузионную стратегию можно сформулировать следующим образом: если слабый антиген D можно идентифицировать с помощью реактивов с анти-D-антителами класса IgM любым методом без применения непрямого антиглобулинового теста, то больному можно переливать эритроциты от резус-положительного донора. Однако в практической работе российских иммуногематологов такой подход зарубежных коллег представляется не совсем оправданным, так как одними серологическими методами нельзя установить причину ослабления экспрессии антигена D. Эритроциты с парциальными антигенами D также могут иметь пониженную агглютинационную активность с анти-D-антителами класса IgM, а больные с такими вариантами антигена D будут подвержены риску анти-D-аллоиммунизации при переливании резус-положительных эритроцитов [26]. Только результаты молекулярных методов исследования (генотипирование) позволяют однозначно выявить причину ослабления экспрессии антигена D. Тип слабого антигена D важно идентифицировать еще и потому, что люди с weak D type 7 и weak D type 4.2 подвержены риску анти-D-аллоиммунизации, несмотря на большую плотность антигенных детерминант на эритроцитах, и им необходимы для переливания эритроциты от D-отрицательных доноров. Применение генотипирования особенно важно в тех популяциях, в которых распространенность подобных типов слабого антигена D высока. В России нами впервые проводится работа по выявлению частоты типов слабого антигена D в российской популяции.

Источник